Medindo a luz: espectrofotometria

A espectrofotometria é uma técnica que mede a quantidade de luz absorvida por uma amostra em função do comprimento de onda, sendo estes correspondentes a região do visível e ultravioleta. É baseada no fato de que cada espécie molecular é capaz de absorver suas próprias frequências características de radiação.

Para esses princípios temos uma lei de absorção, chamada de Lei de Beer. Esta lei nos diz que a intensidade de absorção de uma amostra depende da concentração das moléculas absorventes e da extensão do caminho sobre o qual ocorre a absorção. Denominamos P₀ a energia incidente sobre a amostra e P a energia remanescente. A transmitância (T) é a razão de P sobre P₀, ou seja, a fração da radiação incidente transmitida pela solução. Normalmente expressamos a transmitância como absorbância (A). A absorbância é –log de T. Sabendo-se a absorbância, o caminho óptico (b) e a absortividade molar (ε), pode-se determinar a concentração de uma substância através da equação da lei de Beer²:

A= εbc = log (P₀/P)

Os espectrofotômetros são instrumentos capazes de medir absorbâncias em função do comprimento de onda. O registro dos dados é chamado de espectro de absorção. Normalmente esses instrumentos contem cinco componentes principais: fontes de radiação, monocromador, recipientes para conter as soluções, detectores e indicadores de sinal.